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您有一份《離心機梯度指南》待接收
發(fā)布時間：
2020-05-09
概要：
當離心機制備的提副業(yè)是凹狀梯度時，與凸狀梯度相反，先從混合室里流到離心管的是重端梯度液，制備時，輕液要緩慢的鋪上，因而要求針頭以相應的速度抬起，但在多數(shù)情況下，只是簡單的將離心管斜放一定角度，將針頭烤放于離心管口，使溶液沿管壁緩緩流下，逐步鋪上，加完后，再把離心管垂直放好加樣。此時應注意的是，所選用離心管的材料*好是親水性的，如是憎水性離心管，可用一些鹽，這樣再加入梯度溶液時，可保證均勻的流下。
為了密度梯度和樣品區(qū)帶的穩(wěn)定，加到密度梯度液柱頂部樣品的密度必須小于梯度液頂部的密度，如果不是這樣，樣品將以塌陷的方式通過梯度，直到到達等密度區(qū)。離心機廠在這個過程中樣品層將明顯的擴展，纏上的小滴沉降會造成區(qū)帶分辨力下降。
離心機分離技術的形式有離心沉降、離心過濾、離心分離和離心分析等。
1、離心沉降：依據(jù)不同大小和密度的顆粒在離心力場中沉降速度的不同進行分離。
2、離心過濾：輔以濾材，利用離心力進行分離。
3、離心分離：借助梯度介質(zhì)，利用離心力分離密度和沉降系數(shù)不同的顆粒。
4、離心分析：采用特殊的轉子和檢測手段，測定顆粒的密度、分子量和沉降系數(shù)等物理參數(shù)。
一、離心機梯度介質(zhì)的選用：
1、鹽梯度介質(zhì)。
2、小分子有機物如蔗糖。
3、三碘化苯衍生物。
4、有機高聚物。
5、膠態(tài)二氧化硅。
二、離心機梯度的密度范圍：
1、速率區(qū)帶離心的介質(zhì)密度小于樣品中各種顆粒的密度。
2、等密度區(qū)帶離心的介質(zhì)密度大于樣品中各種顆粒的密度。
三、離心機梯度的容量：
指在達到分離要求的前提下，梯度介質(zhì)容納樣品的大數(shù)量。
1、與樣品組成和分離要求有關。
2、與梯度總體積、斜率和介質(zhì)粘度有關。
3、與轉速和轉子形式有關。
以冷凍離心機的梯度介質(zhì)為例，可以歸結為一下特點,梯度介質(zhì)應該是惰性的，至少對被分離顆粒沒有毒性。應知道梯度介質(zhì)的理化特性，能夠利用這些特性中的一種或多種特性（如折射率）測定梯度介質(zhì)的濃度。梯度介質(zhì)要能夠把懸浮液中的顆粒定量的分離出來，即要求用它所配置的梯度柱要有確定的密度范圍。在給定的密度范圍內(nèi)，梯度介質(zhì)對滲透壓敏感的顆粒應該是等滲的。梯度介質(zhì)應能調(diào)到與被分離顆粒生理狀態(tài)一致的PH值和離子強度，并且不管介質(zhì)濃度如何變化，PH值和離子強度都保持不變，也不會發(fā)生水合作用。在給定的密度范圍內(nèi)，梯度介質(zhì)的粘度應盡可能低。梯度介質(zhì)不會干擾分級分離時樣品區(qū)帶的監(jiān)測。
離心機梯度介質(zhì)應該很方便的從分離的顆粒中除去，并且不損失樣品的活性。能夠消毒，并且分離特性不變，不腐蝕所用的離心管、轉子和各種量器。所用的梯度材料應該是純的物質(zhì)，價格便宜，貴重材料使用后便于回收再利用。
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